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細(xì)胞培養(yǎng)—如何揭開細(xì)胞凍存與復(fù)蘇的秘密！
在美國(guó)科幻大片中，經(jīng)常會(huì)有因?yàn)槟承┨厥庠虮粌龃嫫饋淼某耍褋硪呀?jīng)過了百年，容顏依舊、身體機(jī)能依舊，依然可以拯救人類。這其中就涉及到一個(gè)細(xì)胞凍存的概念，細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，減少細(xì)胞代謝，以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種技術(shù)。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一，起到了細(xì)胞保種的作用。其實(shí)自己也可以動(dòng)手來做關(guān)于細(xì)胞凍存的實(shí)驗(yàn)，下面本生科技就具體來分析下吧!
細(xì)胞凍存操作步驟：
1.用移液器吸走原培養(yǎng)基，加入適量PBS洗1-2遍;
2.加入適量胰酶，置于培養(yǎng)箱中消化;
3.待消化到位后加入適量血清或*培養(yǎng)基終止消化，800-1000rpm離心3-5min;
4.配制凍存液，待細(xì)胞離心后去上清，加入凍存液重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106~1×107 cells/mL，轉(zhuǎn)移到凍存管中;
5.將凍存管放入程序降溫盒中，-80度過夜，然后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。
6.凍存細(xì)胞后應(yīng)取出一管復(fù)蘇，檢測(cè)細(xì)胞的存活率。理論上細(xì)胞可在液氮內(nèi)長(zhǎng)期保存，為穩(wěn)妥起見可在細(xì)胞凍存半年后復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，再繼續(xù)凍存。
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)：
1.凍存液常規(guī)配比為培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1，如果細(xì)胞比較珍貴，可以調(diào)整為血清：DMSO=9:1;
2.如果沒有程序降溫盒，可以將凍存細(xì)胞依次放于4度1h，-20度2h，-80過夜，再轉(zhuǎn)至液氮罐內(nèi);
3.凍存細(xì)胞儲(chǔ)存在-80度中通常不建議超過半年，液氮中通常不建議超過2年;
4.細(xì)胞如果是次養(yǎng)，建議至少凍存兩個(gè)批次以上，以盡量避免因?yàn)閮龃鎲栴}導(dǎo)致細(xì)胞絕種;
細(xì)胞復(fù)蘇操作步驟：
1.準(zhǔn)備工作：開啟恒溫水浴鍋，將溫度調(diào)節(jié)在37℃，取一離心管，加入5ml細(xì)胞培養(yǎng)基;
2.取出凍存管，立即放入水浴鍋中快速搖晃，讓凍存液迅速融化;
3.打開凍存管，將凍存液小心轉(zhuǎn)移到預(yù)先加入有培養(yǎng)基的離心管中，800rpm離心5分鐘;
4.小心棄掉上清，加入約5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞;
5.將所得細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移入培養(yǎng)瓶中，蓋上瓶塞，置培養(yǎng)箱培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的狀態(tài);
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