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本生淺談：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試驗(yàn)辦法
酶聯(lián)免疫測(cè)定是將抗原抗體反響的高度特異性和酶的催化作用相結(jié)合，開展建立一種非放射性符號(hào)免疫分析辦法。因?yàn)镋LISA具有靈敏度高、特異性強(qiáng)，酶免疫試劑的性質(zhì)比較穩(wěn)定，操作辦法簡(jiǎn)潔快速、無放射性污染以及應(yīng)用范圍廣等很多優(yōu)點(diǎn)，在醫(yī)學(xué)根底理論研究，病毒學(xué)和生物化學(xué)查驗(yàn)等工作中應(yīng)用十分廣泛。
該法需將純化的抗原包被在固相載體，與必定稀釋度的待側(cè)血清反響，然后與酶符號(hào)的第二抗體(抗人IgG,IgA,IgM或抗人IgG.A.M的混合物)反響，酶可催化色原反響，在酶標(biāo)測(cè)定儀必定波長(zhǎng)下進(jìn)行比色，測(cè)定吸光度。
ELISA試劑盒的關(guān)鍵是要具備高質(zhì)量純化或重組的抗原，對(duì)生產(chǎn)廠家的抗原要求很高。因?yàn)榧兓幕蛑亟M的抗原越來越多，以及商品化的高質(zhì)量的ELISA試劑盒的面市，它應(yīng)用于臨床免疫試驗(yàn)室的本身抗體的檢測(cè)已日漸增多，該法檢測(cè)本身抗體快速、靈敏及特異性高。
一、免疫熒光法----本身抗體確診的標(biāo)準(zhǔn)技能(IFA)
免疫熒光測(cè)定法可分為直接和直接兩類，在本身抗體檢測(cè)中，以直接免疫熒光法zui為常用。因?yàn)楸旧砜乖姆轿粵Q議了其相應(yīng)的抗體的典型熒光形式，該法能經(jīng)過顯微鏡觀測(cè)地判別安排或細(xì)胞內(nèi)熒光的分布。
將已稀釋血清與試驗(yàn)基質(zhì)進(jìn)行溫育，令特異性抗體與試驗(yàn)基質(zhì)中相應(yīng)抗原結(jié)合，然后再與熒光符號(hào)的第二抗體溫育，zui后在熒光顯微鏡下觀察相應(yīng)部位的特異性熒光形式。
此辦法靈敏、重復(fù)性好。但需要一臺(tái)質(zhì)量較好的熒光顯微鏡，且對(duì)操作人員要較高，操作雜亂耗時(shí)長(zhǎng)，繁瑣。
二、免疫印跡法(Immunoblot assay)(westerblot)
此法是將聚丙xi酰胺凝膠電泳別離蛋白及多肽與免疫反響的高特異性相結(jié)合的一項(xiàng)技能。蛋白質(zhì)在電泳中依分子量大小別離，然后將別離好的蛋白轉(zhuǎn)印到硝酸纖維薄膜上，用酶符號(hào)的抗體或蛋白A進(jìn)行染色。該法簡(jiǎn)單、快速。是現(xiàn)在美國(guó)、中國(guó)等國(guó)際上很多國(guó)家衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的zui終承認(rèn)辦法。但其制備辦法繁瑣、本錢相對(duì)較高。
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