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豬游離血紅蛋白(F-Hb)ELISA試劑盒技術說明
檢測范圍：0.6μg/ml -22μg/ml
96T
使用目的： 豬游離血紅蛋白(F-Hb)ELISA試劑盒用于測定豬全血樣本中游離血紅蛋白(F-Hb)含量。
實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬游離血紅蛋白(F-Hb)水平。用純化的豬游離血 紅蛋白(F-Hb)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入游離血紅蛋白 (F-Hb)，再與 HRP 標記的游離血紅蛋白(F-Hb)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物， 經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下 轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的游離血紅蛋白(F-Hb)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，通過標準曲線計算樣品中豬游離血紅蛋白(F-Hb)濃度。
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2.不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定：以空白孔調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。
豬游離血紅蛋白操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值 大于標準品孔第一孔的 OD 值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存：;2-8℃。
2.有效期：6 個月
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