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酶標(biāo)板的選購及拆裝酶標(biāo)板有哪些注意事項
BUNSEN教您如何選購酶標(biāo)板有哪些注意事項：
在酶聯(lián)免疫吸附試驗中, 參與免疫學(xué)反應(yīng)的抗原、抗體、標(biāo)記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類、濃度和離子強(qiáng)度、pH值和反應(yīng)溫度、時間等條件起著關(guān)鍵作用。此外,作為載體的固相聚苯乙烯表面對抗原、抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附也起著重要作用。
BUNSEN酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴，細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng)，也可以用來測蛋白濃度;酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板，一般不用做細(xì)胞培養(yǎng)，它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測，需要更高的要求和特定的酶標(biāo)工作液。
一：根據(jù)酶標(biāo)板底部的不同，可以分為平底、U型底、V型底
平底的折射率低，適于在酶標(biāo)儀檢測;U型底的酶標(biāo)板折射率較高，方便加樣、吸樣、混勻等操作，可以不用放在酶標(biāo)儀上，直接通過目測觀察顏色變化情況，從而判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng)。V底的酶標(biāo)板可以精確的吸取樣品。
二：根據(jù)酶標(biāo)板與蛋白和其它分子結(jié)合能力的不同，分為高結(jié)合力、中結(jié)合力和氨基化
高結(jié)合力：表面經(jīng)處理后，其蛋白結(jié)合能力大大增強(qiáng)，可達(dá)300~400ngIgG/cm2，主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。使用該類酶標(biāo)板可提高敏感性，并可相對減少包被蛋白的濃度和用量，不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)。抗原或抗體包被后，以非離子去污劑無法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位，需使用蛋白作為封閉劑。
中結(jié)合力：經(jīng)表面疏水鍵被動與蛋白結(jié)合，適合作為分子量>20kD的大分子蛋白的固相載體，其蛋白結(jié)合能力為200~300ng IgG/cm2。由于該類酶標(biāo)板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性，適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體，可降低潛在的非特異性交叉反應(yīng)。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。
氨基化：經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基，其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標(biāo)板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和pH值，其表面可通過離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價結(jié)合的能力，可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性，一部分蛋白分子無法結(jié)合;此外，其表面需有效地封閉。由于親水和共價的表面特性，使用的封閉液必須能夠與非反應(yīng)性氨基基團(tuán)和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團(tuán)發(fā)生作用。
三：根據(jù)顏色分為透明、黑色、白色
透明的是常用的，用于最一般的酶聯(lián)免疫實驗。相對于透明的的板子，還有用于發(fā)光檢測用的不透明的板子，一般有黑色和白色兩種。黑色的酶標(biāo)板自身會有光吸收，所以它的信號相對于白色的板子要低很多，因此一般用于檢測較強(qiáng)的光，如熒光檢測。而白色的酶標(biāo)板就用于較弱的光檢測，常用于一般的化學(xué)發(fā)光。另外黑色的酶標(biāo)板還可以消弱非特異反應(yīng)帶來的問題。有些客戶會問，用一般的酶標(biāo)板可不可以進(jìn)行發(fā)光檢測，回答是不可以的，因為一般從化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中發(fā)射出的光是各向同性的，也就是說各個方向上同等發(fā)射出來的。如果用透明的板子，光不僅會從垂直方向發(fā)散，還從水平方向發(fā)散出來。很容易的就會通過各個孔之間的間隙和孔壁。這樣的話，光較強(qiáng)時相鄰孔之間的影響就會很大，因此不能用透明的酶標(biāo)板來進(jìn)行化學(xué)發(fā)光實驗。
拆裝酶標(biāo)板的注意事項：
酶標(biāo)板在酶聯(lián)免疫吸附試驗中, 參與免疫學(xué)反應(yīng)的抗原、抗體、標(biāo)記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類、濃度和離子強(qiáng)度、pH值和反應(yīng)溫度、時間等條件起著關(guān)鍵作用。
抗原、抗體和其它生物分子通過多種機(jī)制吸附至載體表面，這包括通過疏水鍵、流水/離子鍵的被動吸附,通過引入其它活性基團(tuán)如氨基和碳基的共價結(jié)合，以及通過表面改性后的親水鍵結(jié)合。
BUNSEN酶標(biāo)板的使用注意事項:
拍板動作
當(dāng)需要拍干板內(nèi)的液體時，建議垂直向下拍打，保證板內(nèi)殘留液體甩干程度的一致性。
嚴(yán)禁斜角拍干，斜角拍打的過程中會導(dǎo)致上下板條受力不均，易出現(xiàn)板條脫落的情況，且也會導(dǎo)致液體甩干程度不一致而影響實驗結(jié)果分析。
拆裝動作
當(dāng)需要將板條拆下時，可從板條正面兩端輕輕向上掰動，然后摳取下來，務(wù)必要戴好無塵手套，以免污染板條而影響板條的透光性。
不可從板條的一端強(qiáng)行掰取，容易造成板條斷裂。
在裝板條時，要注意方向，板條兩端分別設(shè)計成方形和半圓形，半圓形那端必須裝在有凸起臺階的卡槽內(nèi)(箭頭所在處)，切勿裝反。
將板條裝入板框后，在兩側(cè)和中間部位都需要進(jìn)行按壓，壓實后方可進(jìn)行后續(xù)實驗。
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