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雞層連蛋白板層素(LN)ELISA試劑盒實驗使用說明書
發布時間:2024/11/20瀏覽:221次
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  雞層連蛋白板層素(LN)ELISA試劑盒實驗使用說明書 本生一直視質量控制為企業的生命,追求企業競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業精神作為標準,以過硬的質量和優良的服務來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發展目標,本生,您信任的合作伙伴!本生試劑盒

  ELISA試劑盒技術流程

  雙抗體夾心法(檢測未知抗原)

  1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次。

  2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

  3、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。

  4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

  5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

  6、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

  間接法(檢測未知抗體)

  1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml, 每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。

  2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)

  3、加酶標抗體:于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.05ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,最后一遍用DDW洗滌。

  4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

  5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

  6、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

  ELISA試劑盒需自備的設備及試劑

  1. 450±10nm濾光片的酶標儀(建議儀器使用前提前預熱)

  2. 單道或多道微量加液器及吸頭

  3. 稀釋樣品的EP管

  4. 蒸餾水或去離子水

  5. 吸水紙

  6. 盛放洗液的容器

  ELISA試劑盒試劑準備

  1. 使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。

  2. 標準品(凍干品):每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管,每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

  3. 濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進行30倍稀釋。

  ELISA試劑盒的儲存及有效期

  1. 未開封的試劑盒:所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意,收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液,終止液保存于4℃,其他試劑保存于-20℃。

  2. 使用后的試劑盒:剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存,開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃,避免潮濕。

  注意:

  試劑盒內酶標條可拆卸,按實驗需求可分多次使用;使用后的剩余試劑盒建議在實驗后1個月內使用完畢。產品過期時間以盒子上的標簽為準,保質期內所有組分都確保是穩定的。

  ELISA試劑盒報告內容及標準

  1、ELISA標準曲線;

  2、詳細的實驗步驟;

  3、完整的實驗報告(試劑耗材,實驗方法,實驗結果及結果說明);

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